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PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的具體操作流程是怎樣的

 更新時間:2022-06-26 點擊量:1450
 
  PEI線性轉(zhuǎn)染試劑是由一種陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,分子量40000,它能與核酸形成復(fù)合物,并使該復(fù)合物進(jìn)入哺乳動物細(xì)胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣泛適。該試劑可在含血清與抗生素的*培養(yǎng)基中發(fā)揮作用,即使在有血清存在的情況下,它仍然能高效的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。實驗操作簡單,對大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞都有較高的轉(zhuǎn)染效率(用于常見細(xì)胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等),并且細(xì)胞毒性較低。
  PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的操作流程:
  1、細(xì)胞鋪板
  提前一天將細(xì)胞種植在六孔板中,以轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度在70%~80%為宜。
  2、轉(zhuǎn)染過程
 ?。?)在轉(zhuǎn)染前2h,移除細(xì)胞上原有的培養(yǎng)基,換為新鮮的*培養(yǎng)基。
 ?。?)將2ug質(zhì)粒DNA用50uL無血清稀釋液稀釋,充分混勻制成DNA稀釋液。
  注意:無血清稀釋液建議采用Opti-MEM或ddH2O
 ?。?)向DNA稀釋液中直接加入4uL轉(zhuǎn)染試劑,室溫靜置10~15min。轉(zhuǎn)染復(fù)合物配制完成。
 ?。?)將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)基中,輕柔混勻。
 ?。?)繼續(xù)培養(yǎng)24~48h,收取細(xì)胞進(jìn)行鑒定或加入相應(yīng)抗生素篩選穩(wěn)定克隆。
 ?。?)使用本產(chǎn)品轉(zhuǎn)染后一般在24h開始進(jìn)入表達(dá)高峰期,36~48h達(dá)到表達(dá)高峰,相對于脂
  質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劉,達(dá)到峰值的時間延后約6~12h。
  PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的注意事項:
  1)本產(chǎn)品對細(xì)胞非常溫和,一般情況下轉(zhuǎn)染后無需進(jìn)行換液操作。
  2)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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