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PEI線性轉(zhuǎn)染試劑特點及常見問題

 更新時間:2022-11-24 點擊量:2152

一、PEI線性轉(zhuǎn)染試劑

PEI又稱為線性化聚乙烯亞胺,是人工合成的含有高密度正電荷的有機(jī)大分子陽離子聚合物。PEIDNA通過正負(fù)電荷的相互吸引形成復(fù)合物,是較為有效的聚陽離子型基因載體,轉(zhuǎn)染效率高。PEI轉(zhuǎn)染試劑可以方便地進(jìn)行化學(xué)修飾,并且不會像脂質(zhì)體一樣破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),所以相對毒性較低。

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二、PEI Max轉(zhuǎn)染試劑(24765-1)特點

·轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低;

·蛋白表達(dá)量高;

·節(jié)約成本:PEI至少能夠降低40%的轉(zhuǎn)染試劑總成本;

·適用于HEK293等真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染;

·適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染;

·適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件;

·無機(jī)試劑,無動物源成分;

·產(chǎn)品穩(wěn)定,質(zhì)控嚴(yán)格;

·工藝流程適用范圍廣,容易優(yōu)化,適合小規(guī)模培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應(yīng)器。

三、PEI轉(zhuǎn)染試劑性能

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1 轉(zhuǎn)染PEI后的抗體表達(dá)

500mL HEK293細(xì)胞(A、CE)CHO細(xì)胞(B、D、F)細(xì)胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)染LPEI、PEI MaxPEI proTM。采用蛋白-A HPLC法檢測單克隆抗體曲妥珠單抗(A、B)Palivizumab單抗(CD)B72-3(EF)的滴度,與LPEI(PEI 25K)相比,當(dāng)使用PEI MaxPEI proTM時,三種抗體的表達(dá)量都較高,但使用PEI Max試劑轉(zhuǎn)染能使所有抗體都有最高表達(dá)。由此可見,PEI Max轉(zhuǎn)染試劑(MW 40000)具有更高的轉(zhuǎn)染效率。

四、轉(zhuǎn)染中的常見問題

1.轉(zhuǎn)染效率低

原因:(1)細(xì)胞活力:使用活力好傳代小于15代的細(xì)胞。

(2)細(xì)胞接種密度高/低:適當(dāng)降低/增加接種密度。

  (3)PEI/DNA比率不合適:進(jìn)行不同基因轉(zhuǎn)染時應(yīng)對PEIDNA的比例進(jìn)行優(yōu)化,以達(dá)到最適比例。

(4)質(zhì)粒片段較大:可根據(jù)實際實驗需要調(diào)整,如適當(dāng)增加轉(zhuǎn)染質(zhì)??偭康?。

  (5)混合方式不當(dāng):質(zhì)粒DNAPEI溶液混合時避免渦旋。同時要注意PEI加入 DNA溶液中的順序。

2.細(xì)胞毒性高

原因:(1)轉(zhuǎn)染液孵育時間過長:過長時間 PEI/DNA 復(fù)合體會導(dǎo)致細(xì)胞毒性。

(2)細(xì)胞接種密度低:適當(dāng)增加接種密度。

(3)PEI/DNA比例高:優(yōu)化合適的PEIDNA的比例。

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司提供多種PEI線性轉(zhuǎn)染試劑,具體信息請咨詢百奧創(chuàng)新客服。

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