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一、PEI線性轉(zhuǎn)染試劑
PEI又稱為線性化聚乙烯亞胺，是人工合成的含有高密度正電荷的有機(jī)大分子陽離子聚合物。PEI與DNA通過正負(fù)電荷的相互吸引形成復(fù)合物，是較為有效的聚陽離子型基因載體，轉(zhuǎn)染效率高。PEI轉(zhuǎn)染試劑可以方便地進(jìn)行化學(xué)修飾，并且不會像脂質(zhì)體一樣破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，所以相對毒性較低。
二、PEI Max轉(zhuǎn)染試劑(24765-1)特點(diǎn)
·轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低；
·蛋白表達(dá)量高；
·節(jié)約成本：PEI至少能夠降低40%的轉(zhuǎn)染試劑總成本；
·適用于HEK293等真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；
·適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；
·適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件；
·無機(jī)試劑，無動物源成分；
·產(chǎn)品穩(wěn)定，質(zhì)控嚴(yán)格；
·工藝流程適用范圍廣，容易優(yōu)化，適合小規(guī)模培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應(yīng)器。
三、PEI轉(zhuǎn)染試劑性能
圖1 轉(zhuǎn)染PEI后的抗體表達(dá)
500mL HEK293細(xì)胞(A、C、E)和CHO細(xì)胞(B、D、F)細(xì)胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)染LPEI、PEI Max和PEI proTM。采用蛋白-A HPLC法檢測單克隆抗體曲妥珠單抗(A、B)、Palivizumab單抗(C和D)和B72-3(E和F)的滴度，與LPEI(PEI 25K)相比，當(dāng)使用PEI Max和PEI proTM時，三種抗體的表達(dá)量都較高，但使用PEI Max試劑轉(zhuǎn)染能使所有抗體都有最高表達(dá)。由此可見，PEI Max轉(zhuǎn)染試劑(MW 40000)具有更高的轉(zhuǎn)染效率。
四、轉(zhuǎn)染中的常見問題
1.轉(zhuǎn)染效率低
原因：(1)細(xì)胞活力：使用活力好傳代小于15代的細(xì)胞。
(2)細(xì)胞接種密度高/低：適當(dāng)降低/增加接種密度。
(3)PEI/DNA比率不合適：進(jìn)行不同基因轉(zhuǎn)染時應(yīng)對PEI和DNA的比例進(jìn)行優(yōu)化，以達(dá)到最適比例。
(4)質(zhì)粒片段較大：可根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整，如適當(dāng)增加轉(zhuǎn)染質(zhì)?？偭康?。
(5)混合方式不當(dāng)：質(zhì)粒DNA和PEI溶液混合時避免渦旋。同時要注意PEI加入 DNA溶液中的順序。
2.細(xì)胞毒性高
原因：(1)轉(zhuǎn)染液孵育時間過長：過長時間 PEI/DNA 復(fù)合體會導(dǎo)致細(xì)胞毒性。
(2)細(xì)胞接種密度低：適當(dāng)增加接種密度。
(3)PEI/DNA比例高：優(yōu)化合適的PEI和DNA的比例。
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