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以下便是PEI轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染步驟所在

 更新時(shí)間:2022-11-27 點(diǎn)擊量:1362
 
  PEI轉(zhuǎn)染試劑是以一種陽(yáng)離子高分子聚合物-聚乙烯亞胺(polyethylenimine,PEI)為載體的基因轉(zhuǎn)染試劑。PEI是在pH中性溶液中具有*正電荷密度的合成聚合物。帶正電的PEI與帶負(fù)電的DNA牢固結(jié)合,并賦予凈陽(yáng)離子電荷,使DNA進(jìn)入細(xì)胞。PEIPrime是一種高性能轉(zhuǎn)染試劑,利用PEI的特性旨在實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量,可重復(fù)性和可擴(kuò)展的瞬時(shí)基因表達(dá)。
  PEI轉(zhuǎn)染試劑能夠高效率轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞系,包括貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。此外,PEI是用于HEK293和CHO懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染的試劑。PEI轉(zhuǎn)染試劑是生產(chǎn)任何具有成本效益的生物制劑的合適選擇,包括重組蛋白,抗體和病毒。它能夠高效率轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞系,包括貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞,具有較高的轉(zhuǎn)染效率,尤其對(duì)于懸浮細(xì)胞(如293-F、CHO-S等)表現(xiàn)出的性能,同時(shí)也具有低毒、高效、操作簡(jiǎn)單等特性,也可用于Invivo動(dòng)物體內(nèi)的高效轉(zhuǎn)染。
  PEI因其高效和低毒的性能,可廣泛用于哺乳動(dòng)物的蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)表明,轉(zhuǎn)染的細(xì)胞蛋白表達(dá)水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他轉(zhuǎn)染試劑,適合重組蛋白的大規(guī)模生產(chǎn)。
  PEI轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染步驟:
  -以HEK293貼壁細(xì)胞為例,步驟如下:
  1、細(xì)胞接種:細(xì)胞密度2-6x106cells/mL。
  2、質(zhì)粒的準(zhǔn)備:在5%最終培養(yǎng)體積的DMEM或培養(yǎng)基中,每106個(gè)細(xì)胞稀釋1.0ugpDNA。
  3、PEI的準(zhǔn)備:在5%最終培養(yǎng)體積的DMEM或培養(yǎng)基中,每106個(gè)細(xì)胞稀釋3.0ugPEIPrime,混勻。
  4、通過(guò)快速,短暫渦旋或顛倒數(shù)次試管,將pDNA和PEIPrime溶液混合在一起。
  5、使pDNA和PEI的混合物在室溫下靜置10分鐘。
  6、一邊旋轉(zhuǎn)板,一邊將pDNA和PEI混合物逐漸滴加到細(xì)胞中。
  7、于37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
  
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