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DNA提取的類(lèi)型與基本原則

 更新時(shí)間:2023-11-23 點(diǎn)擊量:1447
  DNA提取的類(lèi)型與基本原則
  核酸提取通常是開(kāi)啟生物學(xué)研究的第一步,而且提取的核酸質(zhì)量高低也是決定下游實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素之一,那么你知道DNA提取的類(lèi)型與基本原則是什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
  一、核酸提取類(lèi)型:
  1.總RNA提取
  總RNA中,75-85%為rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA),其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5.8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA及核仁小分子RNA等組成。
  2.miRNA提取
  MicroRNAs(miRNAs)是小型的、高度保守的RNA分子,如小干擾RNAs(siRNAs),通過(guò)與他們的堿基配對(duì)調(diào)節(jié)其同源mRNA的分子表達(dá),以預(yù)防通過(guò)各種機(jī)制的表達(dá)。他們已成為進(jìn)行發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞周期的重點(diǎn)監(jiān)管機(jī)構(gòu)。
  3.基因組DNA提取
  進(jìn)行基因結(jié)構(gòu)和功能研究以及基因診斷,通常要求得到的片段長(zhǎng)度不小于100~200kb。在DNA提取過(guò)程中應(yīng)盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素,以保證DNA的完整性,為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。
  4.質(zhì)粒抽提
  質(zhì)粒抽提方法即去除RNA,將質(zhì)粒與細(xì)菌基因組DNA分開(kāi),去除蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì),以得到相對(duì)純凈的質(zhì)粒。
  二、DNA提取的基本原則
  1.保證DNA結(jié)構(gòu)的完整性
  不同的下游實(shí)驗(yàn)對(duì)于DNA結(jié)構(gòu)的完整性有所區(qū)別。如PCR、Southern雜交這一類(lèi)實(shí)驗(yàn)基本保證所需片段的完整,而二代測(cè)序?qū)嶒?yàn)為了獲得全面的序列信息對(duì)DNA的完整性要求更高。
  2.保證DNA的純度
  去除對(duì)下游實(shí)驗(yàn)中酶分子有抑制作用的有機(jī)溶劑和高濃度金屬離子,將蛋白質(zhì)、多糖、多酚等生物大分子的污染降到低,去除其他核酸。
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