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Elabscience熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(E-CK-A211)產(chǎn)品介紹

 更新時(shí)間:2024-03-15 點(diǎn)擊量:952

Elabscience®自主研發(fā)的 Annexin V-FITC/PI Apoptosis Kit,可用于檢測(cè)懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的凋亡。Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸 (PS) 有高度親和力。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸 (PS) 外翻到膜表面,而被熒光染料 FITC 標(biāo)記的Annexin V結(jié)合,可通過流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。由于凋亡晚期或壞死細(xì)胞膜喪失完整性,而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可與雙鏈 DNA 特異性結(jié)合并產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光,與 Annexin V搭配使用,可區(qū)分處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞。本試劑盒檢測(cè)喜樹堿誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡效果如下圖所示:

image.png

實(shí)驗(yàn)操作:

一步法

1.細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo),300 ×g 離心 5 min,棄上清,收集細(xì)胞,PBS 洗滌一次,輕輕重 懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。

2.取 1~5 × 105 重懸的細(xì)胞,300 ×g 離心5 min,棄上清。用 PBS 洗滌細(xì)胞一次,離心后棄上清,加入500 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer 重懸細(xì)胞。

3.細(xì)胞懸液中加入5μLAnnexin V-FITC Reagent5μLPI Reagent (50μg/mL)。

4 輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育 15~20 min。

5 立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

注:流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)Annexin V-FITC可用FITC通道,PI優(yōu)先選擇 PerCP/Cy5.5 通道,其次是ECD通道。

兩步法

1.細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo),300×g離心5 min,棄上清,收集細(xì)胞,PBS 洗滌一次,輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。

2.取1~5 × 105重懸的細(xì)胞,300 ×g離心5 min,棄上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次,離心后棄上清,加入100 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer重懸細(xì)胞。

3.細(xì)胞懸液中加入2.5 μLAnnexin V-FITC Reagent2.5μLPI Reagent (50μg/mL)。(由于兩步法 分辨率更高,染色液用量減半依然可得到媲美一步法的效果;用戶亦可根據(jù)自己的模型進(jìn)行滴定后加入適量的染色液,用更少的量獲得高質(zhì)量的結(jié)果。)

4.輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育15~20 min

5.加入400 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer,混勻樣本。

6.立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)于冰上避光靜置并于 1 小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

注:流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)Annexin V-FITC可用FITC通道,PI 優(yōu)先選擇 PerCP/Cy5.5 通道,其次是ECD通道。

產(chǎn)品選購:

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

E-CK-A211

Annexin V-FITC/PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

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