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ELISA實(shí)驗的注意事項

 更新時間:2024-05-10 點(diǎn)擊量:824
  ELISA法的免疫反應(yīng)部分中,抗原-抗體的親和力、抗原和半抗原的性質(zhì)、測定方法的實(shí)驗條件、酶標(biāo)記物的性質(zhì)等因素均會影響反應(yīng)的敏感性。在酶學(xué)反應(yīng)部分中,酶的濃度、底物的濃度、反應(yīng)pH、溫度、酶的抑制劑和激活劑等因素也影響反應(yīng)的敏感性。下面讓我們一起來看看ELISA實(shí)驗的注意事項吧!
 
  需要注意以下幾點(diǎn):
 
  (1)待測樣品溶液中不能存在與標(biāo)記酶相同的酶、底物、酶抑制劑和其他干擾因素,以防止干擾作用。
 
  (2)聚苯乙烯反應(yīng)板測定時,溶液宜垂直滴入凹孔中間,相繼加入的溶液都覆蓋相同的載體表面積。在吸附、溫育和洗滌等操作中應(yīng)避免劇烈震搖、攪拌等,以保證恒定的吸附容量。在洗滌操作中,由于聚苯乙烯反應(yīng)板凹孔容量小、孔間距離近,故洗滌時要注意每次加入的洗滌液量既要達(dá)到洗滌充分又要避免相鄰孔內(nèi)液體互相污染。
 
  (3)在ELISA中血清陰性對照的顯色反應(yīng)常常是因酶結(jié)合物與固相之間的非特異性吸附所致,可在酶結(jié)合物稀釋時中加入去污劑(如Tween-20)或非特異性蛋白質(zhì)(牛血清白蛋白),減少酶結(jié)合物的非特異性吸附作用。稀釋的酶結(jié)合物置于室溫條件下過久,會影響底物的顯色反應(yīng),所以酶結(jié)合物應(yīng)在使用前稀釋。
 
  (4)一些底物如OPD和TMB在暗處穩(wěn)定,底物溶液要現(xiàn)用現(xiàn)配,酶促反應(yīng)時注意避光。某些含苯環(huán)的底物有致畸變作用或致癌作用,使用時要多加小心,測定完數(shù)據(jù)后,收集反應(yīng)溶液,集中處理,不要流入下水道。
 
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