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腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些注意事項?

 更新時間:2024-04-08 點擊量:1139

原代培養(yǎng)是直接從生物體組織或器官的一部分進(jìn)行培養(yǎng),也稱初代培養(yǎng)。腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)為腫瘤研究及治療提供充足的細(xì)胞來源是癌癥在體外研究的重要工具,與體內(nèi)研究相輔相成。但目前腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)成功率不高的許多問題還需繼續(xù)探討與研究。腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些注意事項?讓我們一起來看看吧!


注意點一:取材部位的選擇非常重要,應(yīng)在癌細(xì)胞集中、細(xì)胞活力較好的部位取材,盡量避免在壞死區(qū)取材;

注意點二:取材后應(yīng)盡快培養(yǎng),最好不要超過24h,如需耽擱時間,可將組織塊于培養(yǎng)液中浸泡,放置于冰浴或4℃冰箱;

注意點三:癌組織周圍的血液、脂肪等正常的組織應(yīng)去除,可以保證癌細(xì)胞的純度;

注意點四:取材方法:獲取的組織塊最好能有指尖大小,太小了可能養(yǎng)不起來,因為細(xì)胞有生物學(xué)環(huán)境,細(xì)胞多了長得也會快,如果細(xì)胞密度太低了,細(xì)胞很難長起來,可能的原因是細(xì)胞分泌的生長因子。

注意點五:切碎癌組織時,可用眼科剪,也可用小刀,避免用大剪刀,所用刀剪要鋒利,以免挫傷細(xì)胞。

注意點六:分散細(xì)胞的方法:機(jī)械和藥物兩種方法。癌組織不同與正常組織,單純用機(jī)械的剪碎辦法,癌細(xì)胞就可以游離出來,成為細(xì)胞懸液。常用胰蛋白酶、EDTA消化分離。如果從含有大量堅硬的結(jié)締組織分離癌細(xì)胞,膠原纖維不能被胰蛋白酶和EDTA消化,則使用膠原蛋白酶消化,如:原代黑色素瘤細(xì)胞,黑色素瘤一般長在肢端,肢端的角質(zhì)層太厚,就需要膠原蛋白酶消化。

注意點七:接種數(shù)量要足夠,造成培養(yǎng)細(xì)胞所必須的生物學(xué)環(huán)境;

注意點八:更換培養(yǎng)液的時可換半量或1/4量,將pH維持在7.2-7.4;

注意點九:新配試劑要做無菌實驗,嚴(yán)格無菌操作,防止污染,新手建議不要直接養(yǎng)原代,先拿實驗室的腫瘤細(xì)胞養(yǎng)養(yǎng)練練手;

注意點十:若組織在消化時間較長時仍未散開,可采用多次提取消化法以減少酶對已消化下來的細(xì)胞的損傷;

更多有關(guān)腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些注意事項?的問題,請聯(lián)系腫瘤細(xì)胞代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司:

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